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SeeDB2
深层组织的高分辨率·高亮度分析

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SeeDB2



SeeDB2是由柯孟岑、今井猛博士等人开发的一种新型组织透明化试剂。特别适用于通过荧光蛋白标记样本的3D高分辨率成像。

  对照SeeDB2G的甘油折射率(1.46)和SeeDB2S的油折射率(1.52),分别用甘油浸没镜头和油浸镜头观察,可见即使在深层部分也没有因为球面像差而引起模糊(分辨率降低)。

  此外值得注意的是在SeeDB2中,荧光蛋白的荧光保持非常稳定,并且优于PBS和其他市售的封固剂。因此,SeeDB2十分适合作为荧光蛋白标记样本的封固剂。它不仅可用于厚样本,还可用于细胞生物学的薄样本和组织切片。

本试剂盒内容:1) 皂素、2) SeeDB2G solution3) SeeDB2S solution4) PBS

SeeDB2是通过调整Permeabilization solutionClearing Solution等各种试剂,可实现透明化的试剂盒。


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数据提供:国立研究開発法人理化学研究所柯孟岑先生、今井猛先生(现九州大学医学研究院)



SeeDB2组织透明化实验案例(小鼠脑切片厚度0.5-2 mm


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*在组织透明化实验中需要注意根据样本量调整试剂量和处理时间。


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图1. 小鼠脑SeeDB透明化案例

小鼠脑切片(1.5mm厚)的SeeDB2处理前后


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图2. 用共聚焦显微镜观察Thy1-YFP H系小鼠脑切片


组织透明化配套耗材:成像用透明室


组织透明化试剂Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q组织透明化的原则

A:组织透明化通常是按下面的步骤进行的:

A:(a)固定 (b)透化 (c)脱色 (d)折射率匹配

 

Q:组织透明化的优势

A:目前大多数可用的透明化技术,都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记,从而可视化组织中特定的蛋白。组织透明化成为了

A:具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。

 

Q:透明化技术的比较

A:下面是水性的透明化技术。


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SeeDB(基于果糖的方法)在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂,所以对于透明化DiI(细胞膜红色荧光探针,一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜(CLEM)的情况下,SeeDB有着一定优势。另外SeeDB会产生自体荧光,有时候会对辨认未标记的神经元结构(如神经毡)起着一定帮助。SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术;因此,当处理较大的组织时,CLARITY或者CUBIC会是更好的选择。

 

Q:切片厚度的最大值和最小值?

A:您应该根据您的物镜的WD(工作距离)来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄且脆弱的样品,我们建议使用琼

A:糖包埋。使用CUBIC,可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。

 

Q:试剂盒成分

A:具体如下:

A:1. SCALEVIEW-S试剂盒(299-79001)适用于20份1-2mm的切片样品

A:A:1) SCALEVIEW-S0——100mL

A:A:2) SCALEVIEW-S1——100mL

A:A:3) SCALEVIEW-S2——100mL

A:A:4) SCALEVIEW-S3——100mL

A:A:5) SCALEVIEW-S4——100mL

A:A:6) SCALEVIEW-SMT——100mL

 

A:2. SCALEVIEW-S试剂盒(290-80801)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) SCaleCUBIC-1 Solution——250mL

A:A:2) SCaleCUBIC-2 Solution——250mL

A:A:3) Mounting Solution 1——40mL

A:A:4) Mounting Solution 2——40mL

 

A:3. SeeDB试剂盒(299-79901)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) SeeDB:20w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:2) SeeDB:40w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:3) SeeDB:60w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:4) SeeDB:80w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:5) SeeDB:100w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:6) SeeDB——50mL

 

A:4. SeeDB2试剂盒(294-80701)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) Saponin(皂角苷)——5g

A:A:2) SeeDB2G solution——50mL

A:A:3) SeeDB2S solution——50mL

A:A:4) PBS——50mL

 

Q:样品的保存

A:SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的荧光信号。CUBIC处理的样品应在

A:室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年,而SeeDB2S处理的样品则

A:可在室温下保存1年。您可以在1年内观察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。

 

Q:抗体的荧光标记

A:应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。

 

Q:适用于SCALEVIEW-S的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

 

Q:适用于CUBIC的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Zeiss Lightsheet Z.1(Carl Zeiss)

 

Q:适用于SeeDB2的显微镜

A:Confocal(最好使用高NA的油浸镜头)

A:STED(Leica Microsystems)

A:SR-SIM(Carl Zeiss)

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Airyscan(Carl Zeiss)

A:HyVolution(Leica Microsystems)

A:Two-photon(最好使用复合浸没镜头)

A:Confocal(最好使用高NA的甘油浸镜头)

A:Light-sheet DLS(Leica,最好使用定制镜面的设备)

 

Q:重构

A:对于定量用途,我们建议使用Neurolucida系统(MBF)。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表现。重构时也可以使用开源软件。

A:例如,Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。

 

Q:物镜推荐

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Q:其他物种?其他器官?

A:对于昆虫样品和鱼类样品,建议选择CUBIC。

A:昆虫相关文献:Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

A:鱼类相关文献:Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

   

  对于多细胞球状体,选择SCALEVIEW-S会更好。

  https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0



参考文献


1.Ke et al.,: Cell Reports 14, 2718(2016)

2.SeeDB Resources (https://sites.google.com/site/seedbresources/): updated information and technical TIPs from the authors.



产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
294-80701 SeeDB2 Trial Kit 1 kit 组织透明化试剂 -

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