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荧光标记 rBC2LCN(AiLecS1)

2514694138412242.jpg未分化人ES/iPS细胞检测试剂

仅需添加培养液便可检出人ES/iPS细胞!

荧光标记 rBC2LCN(AiLecS1)



◆rBC2LCN(AiLecS1)


  rBC2LCN(AiLecS1)是在伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cenocepacia)来源凝集素 BC2L-C 的 N末端域表达的重组凝集素。

  由于 rBC2LCN 对存在于人ES/iPS细胞表面的足糖萼蛋白(Podocalyxin)上的粘蛋白样O-型糖链的H型3(Fucα1-2Galβ1-3GalNAc)具有高亲和力,因此可用作人 ES/iPS 细胞的未分化标志物。

  本产品是荧光染色标记,能直接添加到人 ES/iPS 细胞的培养液中,实现未分化活细胞分析。 适用于未分化细胞检测用标记。可用于细胞染色,流式细胞仪。另外,使用本品持续培养数日已确认细胞无毒性。

  我们供应绿色荧光标记(FITC),黄色荧光标记(Cy3),红色荧光标记(Cy5)的三种类型的系列商品。


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◆特点


● 添加到培养基即可进行染色

● 无需固定细胞,活细胞也可直接进行明显染色

● 细胞毒性低,染色后也可培养

● 识别 Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4 细胞表面存在的糖链

● 可用于细胞染色和流式细胞仪



产品概述


● 已进行无菌试验(0.1 μm 过滤器进行灭菌)

● PBS(-) 溶液

● 使用时稀释比

   Live Cell Imaging 1:100~1,000
   Flow Cytometry 1:100~1,000

● 激发波长/发射波长



Excitation

Emission

rBC2LCN-FITC

495 nm

520 nm

rBC2LCN-547

551 nm

565 nm

rBC2LCN-635

634 nm

654 nm



◆使用方法


细胞染色

活细胞染色(Live Cell Imaging)

1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞

2. 每 1 mL 的培养基添加 1~10 μL 的荧光标记 rBC2LCN

3. 37℃,5%CO孵育 30 分钟。

4. 更换新的培养基或者 HBSS(+)。

5. 利用荧光显微镜观察


固定细胞染色

1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞

2. 除去培养基,用 HBSS(+) 洗净。

3. 添加 4%多聚甲醛(PFA)溶液,室温静置 10~20 分钟。

4. 除去 PFA 后,用 D-PBS(-) 洗净三次。

5. 添加 D-PBS(-)。

6. 每 1 mL 的 D-PBS(-) 添加 1~10 μL 荧光标记 rBC2LCN。

7. 37℃,5% CO孵育 30 分钟。

8. 更换 D-PBS(-)。

9. 利用荧光显微镜观察。


流式细胞仪

1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞。

2. 使用细胞分散液,分散成单细胞。

3. 将细胞分散液移至管内,1,000 rpm 离心 3 分钟。

4. 除去上清液,用 FCM Buffer* 重悬细胞,离心后,舍弃上清液。

* FCM Buffer: D-PBS(-)和HBSS(-)含有 10 mmol/L EDTA,1% BSA

5. 用 FCM Buffer 重悬出 5×10cells/mL 的细胞悬浮液

6. 每 1 mL 细胞悬浮液,添加 1~10 μL 的荧光标记 rBC2LCN。

7. 室温,避光静置30分钟。

8. 1,000 rpm 离心三分钟,除去上清液。

9. 用 FCM Buffer 重悬细胞,离心后,除去上清液。

10.  适量的 FCM Buffer 再悬浮细胞。

11.  进行流式细胞术。


使用注意

1. rBC2LCN 染色可以维持 2~3天。

2. 使用含有血清的培养基可能使信号背景变高

3. 根据流式细胞仪进行细胞分选时,当细胞分散或 FCM 缓冲液的终浓度到达 10 μmol/L 时,请添加 Y-27632。



◆人iPS细胞的活细胞染色(Live Cell Imaging)


● 用 rBC2LCN-FITC, rBC2LCN-635 以及 Hoechst33342 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。(无细胞固定)


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(稀释倍数 1:1,000)



● 用 rBC2LCN-FITC、Tra-1-60、Tra-1-81、SSEA-4 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。

   2小时后确认染色图像。(未固定细胞)


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(稀释倍数 1:100)       



★ 与 Tra-1-60、Tra-1-81 相比较,rBC2LCN 的活细胞染色度更强。

★ 即使交换培养基,rBC2LCN 染色第二天后染色效果依然明显。



◆人ES细胞的活细胞染色(Live Cell Imaging)


  使用 rBC2LCN-FITC 对人 ES 细胞 WA01 株进行染色(未细胞固定)。细胞的一部分无法维持未分化状态而进行分化。如果使用 rBC2LCN-FITC 对活细胞进行染色,以维持未分化状态部分已染色,而已分化部分未染色来进行区分。


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<数据提供 国家研究与发展公司先进工业科学和技术研究院 新药开发的基础研究部门恭子小沼老师,伊藤弦老师>



◆人 iPS 细胞固定后染色


  将人 iPS 细胞 201B7 株用多聚甲醛固定后,使用 rBC2LCN 和 DAPI 进行细胞染色。


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对于人 iPS 细胞毒性评估

  向人 iPS 细胞 201B7 株的培养液中分别添加其 1/1,000、1/100、1/50 量的 rBC2LCN-FITC,持续培养。其结果是,不存在 rBC2LCN-FITC 浓度对毒性影响,不同浓度的细胞增殖程度相同程度。


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〔细胞株〕
 人iPS细胞 201B7株

〔培养基组成〕
 StemSure® hPSC培养基Δ+35 ng/mL bFGF

〔涂层〕
 Matrigel® hESC-Qualified Matrix

〔细胞接种数目〕
 4×10cells/well(12孔板)

 使用Flow Cytometry进行人iPS细胞分离

 使用rBC2LCN-FITC及rBC2LCN-6547、rBC2LCN-635对人iPS细胞201B7细胞株和人正常二倍体成纤维细胞染色,进行流式细胞术。

 实验结果:未分化的人iPS细胞与分化的人二倍体成纤维细胞成功分离。


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产品列表


产品编号

产品名称

等级

容 量

180-02991
186-02993

人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】
    Ex. 495nm, Em. 520nm

用于细胞染色

100 μL
  100 μL×5

186-03211
182-03213

 人iPS未分化标记染料rBC2LCN-547   (AiLecS1-547)

rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】
    Ex. 551nm, Em. 565nm

用于细胞染色

100 μL
  100 μL×5

185-03161
181-03163

人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635   (AiLecS1-635) 

rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】
    Ex. 634nm, Em. 654nm

用于细胞染色

100 μL
  100 μL×5



◆相关产品


★ rBC2LCN 剥离液 ★

本产品能够将结合在人ES细胞▪ 人iPS细胞表面糖链的 rBC2LCN 凝集素从细胞里面剥离出来。剥离 rBC2LCN 之后的细胞能够进行抗体染色,可以继续培养。


产品编号产品名称等级规格
182-03171

rBC2LCN剥离溶液

rBC2LCN Stripping Solution

【AiWashS1】

用于细胞培养10 mL



★ BC2LCN 凝聚素,重组体、溶液未标识 rBC2LCN 系列


产品编号

产品名称

等级

规格

029-18061
025-18063

BC2LCN (AiLecS1)凝集素 

BC2LCN 【AiLecS1】 Lectin, recombinant, Solution

糖链研究用

1 mg
1mg×5



★ StemSure® hPSC 培养基Δ无饲养层细胞条件下可用于维持培养人多功能干细胞(ES/iPS细胞)的无血清液态培养基。原料不含动物体来源成分。


产品编号

产品名称

等级

规格

197-17571
193-17573

StemSure人多能干细胞培养基

StemSure® hPSC Medium Δ

用于细胞培养

100 mL
100 mL×4

064-05381
068-05384
060-05383

成纤维细胞生长因子(碱性),人,重组,无动物衍生物

Fibloblast Growth Factor (basic), Human, recpmbonant,   Animalderived-free 【bFGF/FGF2】

細胞生物学用

50 μg
100 μg
1mg

160-27051

hPSC解离溶液

hPSC Dissociation Solution

 人类iPS細胞用单体细胞分散剂。

用于细胞培养

100 mL



★ StemSure® 系列
   已通过小鼠 ES 细胞 D3 株品质测验。


产品编号

产品名称

等级

规格

197-16275

StemSure D-MEM(高糖)含酚红和丙酮酸钠

StemSure® D-MEM with Phenol Red and Sodium Pyruvate

用于细胞培养

500 mL

198-15781

StemSure10 mmol/L 2-巯基乙醇

StemSure® 10mmol/2-Mercaptoethanol Solution(×100)

用于细胞培养

100 mL

195-15791

StemSure50 mmol/L 硫代甘油(×100)

StemSure® 50mmol/Monothioglycerol Solution(×100)
  可与2ME同等使用的还原剂。医药用外不适用。

用于细胞培养

100 mL

190-15805

StemSure 0.1w/v%明胶溶液

StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution

用于细胞培养

500 mL

195-16031

StemSure干细胞冻存液

StemSure® Freezing Medium

含有BSA的ES细胞・iPS细胞冻存液

用于细胞培养

100 mL

197-17831

StemSure® 人多能细胞冻存液

StemSure® hPSC Freezing Medium, AF

无动物体成分的ES·iPS细胞冻存液

用于细胞培养

100 mL

199-16051
195-16053

StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠,重组

StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution 

用于细胞培养

10units
  10units×10



● ES・iPS细胞研究用试剂
  2007年iPS细胞确立发表后,许多与iPS细胞相关的文献纷纷发表。在各种各样的文献中报道出来的与ES细胞・iPS细胞的未分化能维持和分化诱导相关的低分子化合物也逐渐阵容化。



● 液态培养基・细胞培养用试剂
  我们有着以液态培养基为首的平衡盐溶液、细胞剥离·分散液、抗生物质溶液、细胞外基质等丰富的产品种类。



参考文献


·   Onuma, Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 431, 524, (2013).

·   Tateno, H., et al.: Stem Cells Transl. Med., 2, 265, (2013).

·   Tateno, H., et al.: Sci. Rep., 4, 4069, (2014).



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