NEB最新发表文章:利用GenomONE转染载体诱导iPSC形成


本文献方法研究中使用了Comso Bio公司的GenomONE获得实验数据并进行发布


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GenomONE -Neo EX

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背景

  诱导性多能性的间充质干细胞(iPMSCs)是药物筛选、再生医学和细胞治疗的新型候选药物。然而,用于生成骨髓间充质干细胞的诱导性多能性间充质干细胞(iPSC),在导入编码基因的转录因子中,往往伴随有在靶细胞基因组的插入时发生突变的风险。


方法

  采用新方法使用灭活的病毒颗粒,包装和表达四个纯化重组Yamanaka转录因子(Sox2、Oct4,Klf4和c-Myc),从而引起人初级成纤维细胞的重编程。全基因组亚硫酸盐测序分析人类iPMSCs的全基因组CpG甲基化。使用Western blot、荧光定量PCR、免疫荧光,和体外分化评估iPMSCs的多能性。


结果

  结果中重编程成纤维细胞显示干细胞标记物表达高。人成纤维细胞来源的iPSC基因组显示,在低至中等甲基化区域获得了DNA甲基化,同时在前高甲基化区域有损失。大多数的差异性甲基化区域是靠近转录起始位点,这些基因许多与多能性途径相关。研究发现这些基因的DNA甲基化是由四个iPSC的转录因子调控,有报道称其功能为体细胞重编程的表观遗传的开关。这些iPS细胞在体外和体内都成功分化成三个胚层的细胞。在本研究中分化诱导后,表达的转录因子被降解,从而改善后续程序分化的效率。


结论

  iPMSC的重编程和衍生的重组转录因子提供了患者细胞再生医学的一种高效新方法。


关键词

  体外分化、灭活病毒颗粒、诱导多能性间充质干细胞、诱导多能干细胞、全基因组测序


文献全文请点击:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4967313/



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